Испытание препарата «Нерестин-5КС» при воспроизводстве клариевого сома в условиях УЗВ

Испытание препарата «Нерестин-5КС» при воспроизводстве клариевого сома в условиях УЗВ

Юшкова Ю.А., главный специалист ООО «Акватория», соискатель ФГОУ ВПО Орловского аграрного института

Исследования поводились на базе ООО «Акватория». Выращивание рыбы в хозяйстве проводится в установке замкнутого водоснабжения (УЗВ). Производителей клариевого сома содержали   раздельно по полу,  плотность посадки 25 шт/м³ в пластиковых бассейнах общим объемом воды 2,7 м³ водоснабжение бассейнов  осуществлялось  из системы с оборотным водоснабжением.   Температура воды при содержании производителей в течение всего периода выращивания и содержания сильно не колебалась и поддерживалась на уровне 26 – 28 ^оС.  за 10 – 15 дней до проведения инъецирования и во время него температуру воды в емкостях, в которых содержались производители, поддерживали строго на уровне 28 ^оС.  технические  возможности УЗВ при работе с производителями клариевого сома несколько облегчают проведение искусственного воспроизводства за счет возможности создания и поддержания оптимального температурного режима.

Согласно  рекомендациям  (2005) работу с «Нерестином-5КС» проводили на ограниченной партии рыб и в сравнении с гипофизарным контролем. Для  испытания  «нерестина-5КС» были отобраны самки, ранее принимавшие участие в искусственном воспроизводстве. До этого момента стимуляцию созревания проводили с помощью гипофизарных инъекций, после которых созревало сто процентов самок.

Половые продукты у самцов клариевого сома берут только операционным путем, так как попытки сцеживания спермы не давали ожидаемых результатов, возможно из-за  наличия семенных пузырьков (5). В связи с этим самцов инъецировали однократно с целью повышения активности сперматозоидов. Инъецирование самцов проводили одновременно с разрешающей инъекцией для самок и вводили им половину общей дозы предназначенной для самок. Непосредственно   перед отбором икры у самок самцов умерщвляли и извлекали молоки. Для осеменения молоки измельчали и протирали через сито и в этот момент проводили их визуальную оценку. Использовали  сперму только хорошего качества,  которая имела белый цвет, однородную, густую консистенцию.

Икру  от каждой самки отбирали в отдельную тару, взвешивали и осеменяли смесью молок от 4 – 5 самцов.  После добавления молок икру тщательно перемешивали, затем приливали небольшое количество воды и снова перемешивали. После этого смесь икры и молок аккуратно переливали в аппарат «Вейса», где при температуре 28 ^оС, в течение 24 – 26 часов проходила инкубация.

В опытных вариантах, так же как и в контроле проводилось инъецирование двух групп производителей. В первую группу вошли самки, от которых регулярно через каждые три месяца  получали зрелую икру. В другую группу вошли самки из резерва производителей, которых для целей воспроизводства использовали один раз в полгода. Условия выращивания и содержания  основной и резервной групп производителей были идентичны. В  контрольной группе для стимуляции созревания самок клариевого сома использовали суспензию ацетонированных гипофизов леща (суспензию гипофиза вводили дважды при соотношении доз 20 и 80 процентов при первом и втором инъецировании). Схема  исследований при изучении действия на организм самок синтетического препарата  «Нерестин-5КС» изображена на рис 1.

Критерием оценки правильности выбора дозы Нерестина помимо визуального качества половых продуктов является срок наступления овуляции после разрешающей инъекции. Он должен быть не меньше 10,5 – 10,5 – 13 часов (1, 3, 4)

Рекомендуемая доза «Нерестина-5КС» составляет не более 1 мл/кг.   Стимуляция  созревания самок клариевого сома  этим препаратом была начата с дозы 0,3 мл/кг массы тела, что составило 30 % от рекомендуемой дозы.

Рис. 1.  – Схема исследований при испытании препарата «Нерестин-5КС».

Примечание: на схеме в левом квадрате прописной буквой с цифрой обозначена серия опыта, затем в прямоугольнике в верхнем углу доза препарата, вводимая при первой инъекции, через дробь в  нижнем углу  доза препарата при разрешающей инъекции и в правом квадрате общая доза препарата в мл/кг массы тела.

Дробное введение «Нерестина–5КС» в серии А 1 в дозах, указанных на схеме, не дало положительных результатов. Проверку созревания начали проводить через 8 часов после разрешающей инъекции. Введение препарата способствовало увеличению объема и мягкости брюшка, но овуляция ни у одной из 4 самок так и не наступила, за состоянием рыбы наблюдали в течение суток после разрешающей инъекции.

В  серии В 1  введение самкам «Нерестина–5КС», так же как в серии       А 1 не привело к овуляции икры с той разницей,  что после разрешающей инъекции через  16 – 18 часов  самки при надавливании  на брюшко выделяли единичное количество икринок. Полученные данные  могут свидетельствовать о слишком  малой дозе препарата «Нерестин-5КС» в двух сериях эксперимента.

Таблица  5 - Рыбоводно-биологические показатели самок при  испытании «Нерестина-5КС»   в сравнении с гипофизарным контролем

Примечание: сочетаниями букв обозначена достоверная разница между группами (Р < 0,05 – 0,001). В строке приведены средние значения показателя, в скобках минимальное и максимальное значения показателя.

В серии опыта А 2 иньецировали 4 самки средней массой 1178 г. препарат вводили дважды в общей дозе 0,5 мл/кг при соотношении доз 20 и 80 процентов с интервалом в 12 часов. Овуляция у трех самок наступила  через 16 часов, четвертая самка созрела на 3 часа позже остальных.  От самок было получено 133 – 151 г икры,  рабочая плодовитость составила 97407 икринок. Коэффициент зрелости был невысоким и составил в среднем 11,6 %. Процент оплодотворения – 67,5 – 71 %, выход предличинок –   30,5 – 36,83 %. Невысокие показатели коэффициента зрелости, рабочей и относительной плодовитости и большой интервал между разрешающей инъекцией и овуляцией могли быть вызваны заниженной дозой препарата.

В серии А 3 созревание  самок  было ускоренным, овуляция началась уже через 8,5 часов после разрешающей инъекции, через 9 часов созрело 100 % самок. Коэффициент зрелости  составил 16,3 %. Несмотря на ускоренное созревание, которое наступило раньше на 2,5 – 3,5 часа рекомендуемого срока (1, 3, 4), от всех самок  была  получена икра визуально хорошего качества, без признаков перезревания. Качество икры подтвердилось во время ее инкубации.

Анализ результатов воспроизводства клариевого сома с применением «Нерестина-5КС» при сопоставлении с гипофизарным контролем показал, что наиболее значимые отличия по изучаемым показателям  наблюдаются между серией А 2 и контролем. В опытной группе в среднем от самки получено на 60 г или на 30,5 % (Р< 0,001) меньше икры, чем в контроле.  Коэффициент  зрелости в серии А 2 ниже контрольных значений на 29,7 %, соответственно ниже и другие показатели плодовитости, рабочая и относительная плодовитость в среднем так же ниже на 30 %. Средняя масса икринки достоверно ниже контроля на 1 % (Р< 0,001). Достоверная разница по среднему проценту оплодотворения икры между контролем и серией А 2 составила 21,75 % (Р< 0,001), по выходу предличинок – 20,04 % (Р< 0,001).

В серии А 3 получены более высокие показатели плодовитости, чем в серии А 2, многие из которых приближаются к контрольным значениям. Коэффициент зрелости в серии А 3 ниже, чем в контроле на 1,2 %. Рабочая плодовитость самок в серии А 3 незначительно отличается от показателей, полученных в контроле, а именно  на 2,35 %. Относительная плодовитость, выраженная в г/кг, практически не отличается от контроля, и в серии А 3 составляет 164 г против 165 г в контроле. У самок группы А 3 масса икринки составила 1,421 мг, что несколько больше на 0,2 % (Р< 0,01)  чем у контрольных самок.  Всего в группе А 3 получено 192,5 г, в контроле 196,8 г, но разница по средней массе икры между этими группами оказалась недостоверной.  Средний процент оплодотворения в серии А 3 превышает результат, полученный в серии А 2, разница с контрольным значением составила 0,41 %, но оказалась недостоверной. Процент выхода предличинок после применения «Нерестина» по сравнению с гипофизарным контролем оказался   выше на 2,13 %  (Р< 0,01).

Результаты инъецирования самок в сериях В 2 и В 3 (таблица 1) показывают, что после резервирование самок  в течение шести месяцев при нерестовых температурах они хорошо реагируют  созреванием на введение препарата «Нерестин-5КС». Так, в двух сериях экспериментов, так же как и в контроле созрело сто процентов самок. Созревание в серии В 2 по сравнению с А 2 (при одинаковой дозе «Нерестина») началось раньше  первая самка созрела  уже через 9 часов, то есть на 7 часов раньше, созревание всех самок в среднем  наступило через 9,5 часа, а в группе А 2 только через 16,8 часа. В сериях А 3 и В 3 созревание самок по времени протекало практически идентично. Во всех опытных группах  в независимости от качества полученной икры созревание наступает раньше, чем в контроле.

Сравнение данных полученных в серии В 2 и контроле выявило следующие различия: показатели плодовитости  ниже контрольных значений  более чем на двадцать процентов, достоверная разница по средней массе икринки – 1,35 % (Р< 0,001), по оплодотворяемости икры – 18,17 (Р< 0,001),  по выходу предличинок – 18,45 (Р< 0,001).

Между серией В 3 и контролем отсутствует достоверная разница по большинству рыбоводно-биологических показателей исключение составила выживаемость икры за время инкубации, которая была ниже чем у контрольных самок  на 3,04 % (Р< 0,01).

Результаты экспериментов по применению «Нерестина-5КС» в качестве стимулятора созревания и овуляции икры показали, что дробное введение этого препарата в общей дозе 0,3 мл/кг оказалось не эффективным на самках клариевого сома в не зависимости от интервала  времени, прошедшего между очередными нерестами.

Увеличение дозы  препарата до 0,5 мл/кг (50 % от дозы, рекомендуемой производителями) в серии А 2 стимулировало стопроцентное созревание самок в среднем через 15,8 часов. Такая же доза «Нерестина-5КС» на самках, прошедших резервирование,  вызвала ускоренное  созревание, но при этом как в серии А 2 так и в серии В 2 репродуктивные показатели гораздо ниже контрольных значений, что может свидетельствовать о заниженной дозе «Нерестина-5КС», которой было недостаточно для более полной овуляции икры.

Дальнейшее увеличение общей дозы «Нерестина-5КС» до 0,8 мл/кг в серии А 3 и  В 3   стимулировало более полное созревание и овуляцию икры, что было выявлено при сопоставлении результатов,  полученных в этих сериях с сериями  А 2 и А 3, а так же с гипофизарным контролем.

Полученные данные в сериях А 3 и В 3, свидетельствуют об отсутствии необходимости дальнейшего увеличения общей дозы «Нерестина-5КС» в виду незначительной разницы между показателями, полученными в опытных и контрольных группах.

На основании данных, полученных в ходе экспериментов серии А 3 и  В 3,  «Нерестин-5КС» можно  рекомендовать для замены  ацетонированных гипофизов карповых рыб (леща) с целью получения овулировавшей икры от самок клариевого сома. При этом в не зависимости от того, проходили ли самки резервирование или нет, оптимальным является  дробное введение  «Нерестина-5КС», по следующей схеме –  0,16 мл/кг, то есть 20 % от общей дозы при первом инъецировании и 0,64 – при второй инъекции (80 %) с интервалом между инъекциями   12 часов. При работе с «Нерестином-5КС» необходимо учитывать следующие особенности:

- в случае созревания самок, после разрешающей инъекции овуляция наступает достаточно быстро, уже через 8 – 10 часов. Это  надо обязательно учитывать при планировании процесса воспроизводства, чтобы не допустить перезревания самок и потери качества икры.

- Введение препарата уже при предварительном инъецировании провоцирует очень беспокойное поведение самок. Поэтому во время нереста производителей во избежание их самотравмирования необходимо содержать только индивидуально в очень просторных и обязательно затемненных садках.

В целом, за исключением некоторых особенностей указанных выше технология воспроизводства клариевого сома с использованием синтетического препарата «Нерестин-5КС» не отличается от таковой при применении в качестве стимулятора созревания суспензии гипофиза. Поскольку  препараты серии «Нерестин» выпускается уже в готовом виде это, конечно, облегчает и ускоряет процесс проведения инъекций особенно при большом количестве самок.