Вводные пояснения к применению препарата «Нерестин» на карпе в зависимости от температуры воды и других факторов.

Эта статья дается аноносом и будет опубликована в сборнике научных работ "Пресноводная аквакультура: состояние, тенденции и перспективы развития", г.Кишинев, Молдова, НИРХС, 2005 год(декабрь).

УДК 639.3.045.69.25.47.

вводные пояснения к применению препарата «Нерестин» на карпе в зависимости от температуры воды и других факторов.

Пущинский государственный университет Министерства образования и науки РФ, Россия, 142290, Московская обл., г. Пущино, проспект Науки, 3.

Тел./факс: Тел: 8(962) 960-14-78

8(4967) 73-15-00

Тел: 8(495) 505-07-60

E-mail:  aqua-pushchino@yandex.ruaqua-pushchino@yandex.ruЭтот e-mail адрес защищен от спам-ботов, для его просмотра у Вас должен быть включен Javascript
www.nerestin.ru

Применение на сазане и карпе препаратов Нерестин-1 при 2-кратном введении в общей дозе 0,5-0,7 мл/кг для ♀, Н1Б (0,33-0,46 мл/кг) и Н1А (0,25-0,35) дает близкие к нормативам результаты только в ограниченном диапазоне оптимальных условий. Это регулируемый температурный режим преимущественно в тепловодных хозяйствах, t⁰ воды от 20⁰C с подъемом после инъекций на 1,5-3⁰С. Это только взрослые непервонерестующие самки, яичники которых находятся в состоянии, близком к зрелости (мягкое округлое брюшко, покраснение генитального отверстия, или же при относительно твердом брюшке проба икры щупом выявляет ее высокую степень зрелости и ядра большинства ооцитов старшей генерации располагаются у оболочки икринки). Для самок карпа первонерестующих, или с твердым брюшком и незрелыми ооцитами, или в условиях нерегулируемого температурного режима при t⁰ ниже 18-20⁰С (оптимальной нерестовой) и тем более ниже нерестового порога (при 14-16⁰С), применение данных препаратов требует 3-5-кратных дробных инъекций с интервалом 24 час. и не дает стабильных результатов. Так, сотрудник ТИНРО Е.И. Рачек в Лучегорском тепловодном садковом хозяйстве (РФ, Приморский край, III зона) в 2005г. при t⁰=21-23⁰C ввел 2- и 3-кратно Н1 в дозе 0,5-0,7 мл/кг (0,1+0,4; 0,1+0,4+0,2) 16-ти ♀ амурского сазана массой 2,9-10,65 кг с интервалом11-16 час. В нересте использовали 7 шт. впервые созревших 3-летних ♀; им дополнительно пришлось вводить разрешающую дозу карпового гипофиза после предварительного введения 0,5 мл/кг (0,1+0,4) Н1. Через 8-11 час. после разрешающей инъекции созрело 70,5% ♀ сазана, получено в среднем по 640г икры от ♀ с оплодотворением 46-88% и вылуплением 40-83%. Здесь же при t⁰=22⁰C удалось «отнерестить» с помощью Н1 в дозе 0,5 мл/кг (0,1+0,4 с интервалом 12 час.) самок немецкого карпа (масса 12,2 кг, интервал между введениями 12 час., созревание – через 16,5 час., получено 1270г икры, оплодотворение – 90%, вылупление – 82%) и японского карпа кои (соответственно: 5,0кг, 12 час., 17 час., 77% и 71%). В этом хозяйстве никогда не было проблем в эффективности применения Н1 на ♂ сазана, карпа и кои. Сазаны хорошо отдавали сперму в объеме 7-10 мл за одно сцеживание через 8-10 час. после 1-кратного введения Н1 в дозе 0,25 мл/кг, и затем от них еще 1-2 раза получали сперму в таком же объеме. Для ♂ немецкого карпа дозу увеличивали до 0,35 мл/кг и сперму получали, но не более 3 мл за 1 сцеживание, и от кои по 3-7 мл.

С разработкой препаратов Н4, Н6 и Н6А, судя по результатам их испытаний в 2004-05гг., появилась возможность полноценной эффективной замены гипофизарных инъекций на карпе, кои и сазане практически во всех зонах рыбоводства (с I по VII) и во всех типах рыбоводных хозяйств. В т.ч. стало возможным воспроизводить карпа на естественной воде при нерегулируемом температурном режиме, при t⁰ ниже оптимальной нерестовой и даже, с использованием дробных 3-5-кратных инъекций, ниже нерестового порога, а также на рыбах, яичники которых изначально не находились в состоянии, близком к зрелости и не было четкой поляризации ооцитов старшей генерации со смещением ядра к оболочке икринки. Испытания проведены в очень разнородных условиях при t⁰ воды в диапазоне от 14,0 до 24,5⁰С всего примерно на 1800 ♀ и 950 ♂. Отразить условия и результаты этих испытаний в формате одной статьи невозможно.

Было наиболее важно правильно определить дозу препарата и схему его введения в зависимости от средней t⁰ воды и диапазона ее колебаний для получения от карпа половых продуктов хорошего качества. Однако поначалу мы давали только самые общие рекомендации по дозам препаратов: Н4 и Н6 для ♀– 0,5 мл/кг, Н6А – 0,25 мл/кг для субоптимальных нерестовых температур, для ♂ – 1/3 – 1/2 от дозы для ♀ самок. Из-за отсутствия опыта работы с новыми препаратами, при t⁰ воды выше 18⁰С и особенно выше 20⁰С рыбоводы не смогли самостоятельно снизить дозы и в основном попадали в диапазон передозировок с резким сокращением периода от последней, а иногда и от первой инъекции до момента созревания рыб, с досрочными овуляцией и спермиацией, что снижало величины всех контролируемых параметров относительно нормы, уменьшало жизнеспособность и конечный выход деловых личинок. Такое происходило даже в условиях низких t⁰, когда последняя 1/2-1/3 часть периода созревания ♀ приходилась на дневное время повышения t⁰.

Ниже приведен полуэмпирический, предварительный график зависимости доз препаратов Н4, Н6 и Н6А для ♀ карпа и сазана при наиболее распространенной 2-кратной схеме введения препаратов. График приемлем для т.н. «среднеоптимальных» (по всему многочисленному объему существенных параметров), реально складывающихся в хозяйствах условий работы и рекомендуется для испытаний в 2006-07гг. с последующей корректировкой и доработкой.

График зависимости доз Нерестина-4, 6 и 6А от температуры воды для карпа и сазана при двукратном введении препарата и соотношении доз 20% (предварительная инъекция) + 80% (разрешающая инъекция). График «подразумевает», что конкретные дозы препаратов, исходя из принятой схемы инъецирования, рассчитываются по точной t⁰ в момент укола.

Однако дозы Нерестина и схемы его введения зависят не только от t⁰ воды и ее изменений в предшествующем сезоне (градусо-дни) и в пред- и послеинъекционном периоде (градусо-часы), но и от степени зрелости производителей и исходной гетерогенности икры, от условий созревания рыб, их здоровья, кормления и преднерестовой подготовки, периода инъецирования в ходе нерестового сезона (до сезона, в его начале, середине и в конце), кислородного, гидрохимического режима, наличия и концентрации в воде ихтио- и эмбриотоксикантов, от высокой степени толерантности и резистентности к ним аборигенных рыб местной селекции или, наоборот, сверхчувствительности к деоптимизации факторов среды недавно завезенной породистой элиты, от породы, возраста, размера и упитанности рыб, соотношения массы рыб и массы гонад, плотности посадки рыб и способов послеинъекционного выдерживания, перепадов атмосферного давления, свето/темнового режима, времени суток инъецирования и его соответствия физиологии рыб (хронобиология!), планируемого срока получения половых продуктов, в т.ч. с учетом удобства работы персонала, от грамотности и профессионализма персонала инкубцехов, бережности работы с рыбой и от ряда других существенных факторов. При суммарно оптимальном раскладе этих показателей возможно дополнительное снижение общих доз препаратов относительно указанных на графике, а также уменьшение количества инъекций и интервалов между ними в среднем на 50%. А при градуальном суммировании неоптимальных факторов, наоборот, потребуется увеличение доз относительно рекомендуемых до 50%, а также количества дробных инъекций и интервалов между ними с изменением пропорций доз. Итого максимально возможный для ♀ карпа диапазон доз препаратов в интервале t⁰ от 14 до 24⁰C и с учетом других условий, с применением 1-5 инъекций через разные интервалы времени при постепенном увеличении доз, может составлять: для Н4 – 0,13-1,5 мл/кг, для Н6 – 0,12-1,35 мл/кг, для Н6А – 0,06-0,68 мл/кг. Диапазон доз очень широкий, почти 10-ти кратный (только в зависимости от изменений t⁰ в этом интервале – 4,5-5-кратный), и, с учетом технических ограничений нижнего и верхнего объема вводимой жидкости при одном уколе, требует от рыбоводов правильного выбора типа препарата в зависимости от индивидуального веса, состояния рыб и других местных условий.

В многофакторной биологической системе для осуществления ее эффективного контроля следует выделять из массы более или менее значимых параметров 1-3 критерия, по которым следует регулировать весь процесс. К ним относятся, как правило, значения интегральных параметров с «наизамедленной» кинетикой. Нам представляется, в отличие от пока наиболее принятой точки зрения, что одним из главных контролируемых параметров, который надо стараться поддерживать в разных условиях на почти постоянном уровне или в узком диапазоне значений и именно для этого изменять дозы и схемы введения препаратов, является период времени от последней (разрешающей) инъекции до получения половых продуктов. Во всяком случае этот период после введения Нерестина не должен быть короче рекомендованных прежними инструкциями для гипофизарных инъекций сильно вариабельных сроков созревания самок карпа: через 23-28 час. при t⁰=15-16⁰C, через 20-23 час. при t⁰=17-18⁰С, через 18-20 час. при t⁰=19-20⁰C, через 14-18 час. при t⁰=20-22⁰С и не раньше 12 час. при t^{0 =} 22-24⁰C. Такая вариабельность (12-28 час.) в значительной мере определялась упрощенной практикой введения водных суспензий ацетонированных гипофизов примерно в его одинаковых количествах (3,5 мг сухого гипофиза карпа или леща на 1 кг массы ♀ и 1,75 мг или на 1 кг массы ♂) и объемах вводимой суспензии, но в малой, максимум 2-2,5-кратной степени зависимости дозы от t⁰ воды.

Этот период для карпа (и особенно для растительноядных рыб) не должен быть сокращен из-за передозировок препаратов и усиления гормональных команд гонадам, т.к. это период сложных и многоэтапных физиолого-биохимических процессов подготовки полноценных половых клеток к центральному биологическому акту успешного оплодотворения с осуществляемой по ходу этой подготовки элиминацией предсуществующих генетических, эпигенетически инициируемых и спонтанно возникающих повреждений ДНК ферментативными репарационными системами доэмбриональной клетки. Кратко говоря: сокращение этого периода есть неполная или неполноценная репарация повреждений генома половых клеток со всеми последующими аномалиями их созревания, оплодотворения и развития эмбриона.

Более чем 2-кратное превышение всего возможного диапазона доз Нерестина по сравнению с аналогичным диапазоном для гипофиза связано с тем, что препараты гипофиза – это готовые «чужие» гонадотропные и плюс еще другие гормоны; они дозово-зивисимо действуют на конечные мишени гонады, «выключают» по системе обратной связи работу своего гипофиза инъецируемой рыбы, вызывая его гипофункцию, подвергают рыб риску анафилактического шока и гибели от передозировка чужеродного белка. Напротив, Нерестин не содержит белковых и иных иммуноактивных продуктов, не дает риска анафилаксии, не «напрягает» и не ослабляет иммунную систему рыб в острый период физиологической перестройки их организма на репродукцию, не снижает его защитно-восстановительных и компенсаторных возможностей. Нерестин действует только как триггер на гонадотропоциты аденогипофиза, через специфические рецепторы запуская синтез и секрецию собственных видоспецифичных гонадотропинов и больше никаких других гормонов. Вместе с тем, именно эти рецепторы аденогипофиза имеют чувствительную сложно-опосредованную температурно-зависимую регуляцию и, кроме того, могут градуально и фатально блокироваться токсикантами при их уровнях в воде с превышением нормы и тем более выше ПДК. Впрочем, и в инструкциях по применению гипофиза есть требование держать t⁰ воды на заданном уровне с подъемом на 2-3⁰С, и чтобы она ни в коем случае не снижалась (даже в пределах нерестовой) в последней трети срока созревания ♀, а наиболее благоприятной t⁰ для созревания ♀ карпа указаны +20⁰С.

Следует учитывать, что созревание половых продуктов, переход из IV в V стадию, оплодотворение и особенно ранние стадии эмбрионального развития оплодотворенной яйцеклетки наиболее чувствительны к действию неблагоприятных, повреждающих химических и физических факторов внутренней и внешней среды. Именно поэтому нормативные и предельно допустимые величины гидрохимических параметров для воды инкубационных цехов, для емкостей прединъекционного выдерживания производителей, для преднерестового кормления и для стартовых кормов - наиболее жесткие по сравнению с аналогичными требованиями при других видах рыбохозяйственной деятельности. Этот общеизвестный биологический факт лежит в основе использования развивающейся икры как очень чувствительного и интегрального тест-объекта на наличие и активность абиотических и генотоксических компонент, а также на эффективность работы биохимических систем репарации повреждений. Он ранее использован нами для самого жесткого скрининга всех компонент и композиций препаратов, заменяющих натуральный гипофиз в искусственном воспроизводстве рыб. В действующих в организме рыб концентрациях используемые синтетические композиции по тестам оплодотворения, развития икры, ее отхода на наиболее критической стадии гаструляции, вылупления личинок и их дальнейшего развития, наличия аномалий развития и уродств не повышают самый низкий (естественный) «фон», характерный даже для самых оптимальных, полностью биотических условиях осуществления процесса, не говоря уже о реальных далеко не благоприятных современных условиях работы.

Базовые принципы корректировки доз новых препаратов и выбора схем инъецирования ♀ и ♂ в зависимости от условий следует использовать в основном те же самые, что и для гипофизарных инъекций, основанных на методе Гербильского 30-х годов (еще немного раньше инъекции гипофиза применили рыбоводы Бразилии). Все это есть и подробно описано в добрых старых руководствах и обзорах (Конрадт, Сахаров, 1969; Гамаюн и соавт., 1976; Липпо, 1983; Сим До Тхек, 1984; Сборник…, 1986, т.1, с.105-136), далее воспроизведено с вариантами и частично дополнено в последующих изданиях по теме.

Для «новоиспеченных» рыбоводов в возрождающихся карповых хозяйствах из любого региона мы можем предоставить необходимые инструкции по электронной почте при обращении через интернет на наши адреса: romzes1p@yandex.ruromzes1p@yandex.ruЭтот e-mail адрес защищен от спам-ботов, для его просмотра у Вас должен быть включен Javascript . Основное условие – работа с новыми препаратами Нерестин и обязательное предоставление протоколов (актов) испытаний на основании точного и подробного ведения журнала работ специалистами инкубцехов.

Одно из частных отличий новых негормональных препаратов от гипофиза – они не содержат посторонних биологически активных веществ, таких, как тиреотропный гормон. Последний значительно повышает уровень обменных процессов, в связи с чем у рыб после введения гипофиза возрастает потребность в кислороде. После введения Нерестина этот эффект почти отсутствует, рыбы вплоть до момента созревания ведут себя относительно спокойно (! – не упускать момент созревания и не затягивать более чем на 15-20 мин. отцеживание икры после овуляции ее основной части). Поэтому нет необходимости перенасыщения воды кислородом, более того гипероксия в данном случае вредна так же как и гипоксия при рО₂ ниже 4-5 мг/л. В зависимости от t⁰ воды содержание в ней кислорода следует поддерживать в равновесном состоянии при значениях из известной таблицы (Муравьев, 1999, стр.109) до порога 100%-ного насыщения. В диапазоне t⁰ воды 14-24⁰С этот порог соответствует интервалу рО₂ 10,26-8,33 мг/л.

Что касается ♂ карпа и сазана, то они на препараты Н4, Н6 и Н6А в дозе от 1/4 до 1/2 (редко 2/3) от общей дозы для ♀ реагируют, как и при гипофизе, достаточной по количеству и качеству спермиацией в 90-100%% случаев, даже при t⁰ ниже нерестовой. В начале нерестового периода им вводят препараты чаще сразу после первой инъекции ♀ в дозе 1/2, а в конце периода или в южных регионах – во время разрешающей инъекции в дозе 1/3 – 1/4. Так, 12.05.2005г. в Янгиюльском «Зональном рыбопитомнике» Узбекистана (VII зона) после введения ♂ карпа препарата Н6 в дозе 0,13-0,15 мл/кг в период разрешающей инъекции ♀ (средняя t⁰=20,5⁰С, суточные колебания от 2 до 5⁰С, рО₂ до 8,0 мг/л, рН=8,0-8,5) все ♂ оказались сильно текучими ко времени овуляции у ♀ качественной икры, с последующим оплодотворением и развитием ее и личинок без каких-либо аномалий, связанных с препаратом.